Сравнительное исследование иммуномодулирующих свойств КФС «Природный антибиотик» и «Живая вода»
Радькова Л. И., врач-терапевт, физиотерапевт, психолог, преподаватель высшей категории ВГГТК г. Владивосток.
Вода характеризуется двумя очень важными параметрами – рН и редокс-потенциалом (окислительно-восстановительным потенциалом). При снижении рН тканевой жидкости организма человека с физиологичного значения 7.2 до кислотных показателей происходит развитие заболеваний, в том числе онкологических. «Мёртвая» вода – анолит c кислым значением рH от 2.5 до 3.5, что обусловливает ее бактерицидные свойства, тогда как «живая» вода является католитом с щелочным значением рН=8.5 – 10.5 и обладает выраженными качествами биостимулятора. Для поддержания нормальных показателей человеку необходимо потреблять воду с щелочным рН, т. е. «живую» воду. Но при этом необходимо учитывать, что потребление «мертвой» воды, благодаря ее антисептическим, антиаллергическим, противоглистным, противозудным и противовоспалительным свойствам, также необходимо. Показано, что при употреблении «мертвой» воды снижается давление за счет регуляции стенок кровеносных сосудов, улучшается выведение вредных продуктов жизнедеятельности организма. А ежедневный прием «живой» воды обеспечивает восстановление иммунной системы организма, антиоксидантную защиту, на фоне стимуляции биопроцессов организма.
Поляризация воды в состояние «мертвой» с помощью КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» позволяет применять его с целью очищения организма от болезнетворных патогенов. Использование КФС «ЖИВАЯ ВОДА» позволяет структурировать воду, при употреблении которой интенсифицируются метаболические процессы в тканях организма, снижается восприимчивость к воздействию неблагоприятных факторов и улучшается общее состояние здоровья. Таким образом, сочетанное применение КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» позволяет на фоне очищения от последствий воздействия вредных факторов улучшить деятельность организма для восстановления утраченного гомеостаза.
Цель исследования – изучить воздействие КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» на бактерии Salmonella enteritidis и клетки врожденного иммунитета.
Материалы и методы
Использовали КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» с записанной информацией воды 2016 и 2012 годов.
Контакт c КФС проводился отдельно c микроорганизмами Salmonella enteritidis, после воздействия 30 и 60 мин определялась их жизнеспособность специфическим красителем – акридиновым оранжевым. Для оценки морфологии бактерий производили флуоресцентное микроскопирование препаратов при условиях флуоресценции: длина волны возбуждения – 430 нм, отсекающий фильтр – 515 нм.
В качестве модели использовали первичную культуру нейтрофилов и моноцитов/макрофагов из крови. Фракцию адгезирующих клеток получали из гепаринизированной (10 ед/мл) венозной периферической крови. В камере Горяева подсчитывали количество клеток с верификацией нейтрофилов и мононуклеаров по форме клеточного ядра. Число моноцитов составляло от 1 до 5% и нейтрофилов – от 47 до 72% от общего количества ядросодержащих клеток. Концентрацию клеток доводили до 2×106 кл/мл, клеточную суспензию разносили в пробирки Эпендорфа. Лейкоцитарную суспензию вносили в лунки плоскодонного планшета для иммунологических реакций по 100 мкл в лунку, в триплетах для каждого образца. Время воздействия КФС составило 30 и 60 мин, после чего вносили суспензию бактерий из расчета 1 фагоцит на 10 микробных клеток. В качестве контроля служили клетки без воздействия КФС. После воздействия клетки высушивали на воздухе, фиксировали в парах формалина в течение 15 мин.
Определение активности АТФазы и 5-нуклеотидазы. После контакта клеток с образцами отбирали адгезированные клетки, переносили в лунки иммунологического планшета, добавляли по 20 мкл субстрата для АТФазы, содержащего 8 мг АТP («Sigma-Aldrich», США) на 1 мл трис-HCl-буфера рН 7.8, включавшего 87 мг NaCl, 28,7 мг KCl, 52 мг MgCl2 6 H2O и отдельно по 20 мкл субстрата для 5`-нуклеотидазы, содержащего 4 мг АМФ («Sigma-Aldrich», США) на 1 мл указанного выше буфера, включающего 87 мг NaCl и 70 мг MgCl2, оставляли на 30 и 60 мин соответственно. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл смеси аскорбиновой и молибденовой кислот в соотношении 1:1. Через 20 мин оптическая плотность субстратов измерялась на вышеуказанном анализаторе при длине волны 620 нм.
Определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ). В лунки планшетов с адгезированными клетками добавляли по 100 мкл субстрата для определения ЛДГ субстрат, содержащий 2 мг/мл йоднитротетразолия («Sigma-Aldrich», США), на основе указанного выше буфера и инкубировали при 37 °С в течение 30 мин. Клетки с включенными гранулами диформазана разрушали путем внесения 100 мкл изопропилового спирта, подкисленного 0.04 М HCl, в течение 20 мин. Оптическая плотность субстратов измерялась на иммунологическом анализаторе при длине волны 650 нм.
Определение активности цитохромоксидазы (ЦХО). К фиксированному монослою фагоцитов добавляли 100 мкл 0,1 М ацетатного буфера (рН 5,5), содержащего 10 мг/мл MnCl2, 0,33% перекиси водорода и 2 мг/мл диаминобензидина (ICN). После инкубирования в течение 10 мин при комнатной температуре реакцию останавливали добавлением 10% раствора серной кислоты по 100 мкл на лунку. Количество образующегося продукта определяли по поглощению на спектрофотометре при 492 нм. В качестве контроля использовались образцы с растворами субстратов и 10% серной кислоты.
Результаты спектрофотометрического анализа активности ферментов выражали в виде унифицированного показателя – индекса стимуляции (Т), в процентах, который вычисляли по формуле: Т = (No–Nk)/Nk х 100; где Nk – средний показатель оптической плотности исследуемого субстрата в нестимулированных клетках; No – средний показатель оптической плотности исследуемого субстрата в стимулированных клетках.
Результаты и обсуждение
При изучении бактерицидных свойств Корректоров обнаружено, что они обладали цитостатическим действием на S. еnteritidis (рис. 1). Наиболее сильный эффект выявлялся при воздействии КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» в течение 60 мин. Увеличивалось количество бактерий с разрушенной ДНК и уменьшалось число делящихся микроорганизмов. Под влиянием КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» отмечалась смешанная популяция палочковидных и кокковидных форм микроорганизмов (рис. 1), что указывало на угнетающее действие изучаемых Корректоров.
При исследовании ферментативной активности клеток в отношении бактерий, предварительно до внесения к фагоцитам подвергнутых воздействию КФС в течение 30 и 60 мин, обнаружено достоверное (р<0.05) различие в показателях стимуляции. В случае контакта с S. еnteritidis, подвергнутых воздействию КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК», выявлялась повышенная активность эктоферментов мембраны клеток – 5`-нуклеотидазы и АТФ-азы (рис. 2а, 2б), а также фермента кислородзависимой системы – лактадегидрогеназы. Особенно это выражено после 60-минутного воздействия на бактерии. Тогда как в отношении показателей внутриклеточного содержания цитохромоксидазы, напротив, обнаруживалось снижение ее активности, что указывало на меньшее цитотоксическое воздействие бактерий на клетки.
Показатели ферментативной активности клеток, зараженных бактериями, после воздействия КФС «ЖИВАЯ ВОДА» достоверно (р<0.05) были ниже, чем индекс стимуляции для клеток, контактировавших с бактериями, обработанными КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК».
В целом полученные данные указывают на бактерицидное воздействие КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» на сальмонеллы, в результате чего в отношении такого типа ослабленных микроорганизмов отмечается повышенная ферментативная активность фагоцитов. В этом случае бактерии быстрее обеззараживаются и перевариваются фагоцитами.
При изучении воздействия КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» на клетки врожденного иммунитета обнаружена низкая активность эктоферментов мембраны клеток – 5`-нуклеотидазы и АТФ-азы и фермента бактерицидной кислородзависимой системы лактатдегидрогеназы (рис. 3), что, в общем, ожидаемо. Данный Корректор не должен обладать стимулирующим воздействием на здоровые фагоциты, так как в них нет патогена. Тем не менее информация, воспринятая клетками при воздействии КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК», при их контакте с бактериями была выражена в виде резкого возрастания активности указанных ферментов (рис. 3а, 3б, 3в). Эти данные подтверждают факт преобразования водной среды клеток и понижение рН, так как известно, что при таком значении активность ферментов возрастает. Причем резкое снижение внутриклеточного содержания цитохромоксидазы после 120 мин контакта в зараженных S. еnteritidis фагоцитах указывает на уменьшение цитотоксического действия микроорганизмов.
Подобным воздействием на клетки обладает КФС «ЖИВАЯ ВОДА» (рис. 4). Обнаруживалось невыраженное действие на ферментативную активность незараженных клеток, тогда как информация, заложенная в фагоциты при их контакте с КФС, реализовалась ими в процессе поглощения (30 мин) и переваривания бактерий (120 мин). На это указывал более высокий индекс стимуляции ферментов, по сравнению с клетками, зараженными S. еnteritidis (рис. 4). Под влиянием КФС «ЖИВАЯ ВОДА» достоверно (р<0.01) усиливалась активация нейтрофилов и макрофагов в ответ на инфицирование S. еnteritidis. Необходимо отметить, что при изучении активности фермента кислородобразующей бактерицидной системы в зараженных бактериями фагоцитах, наиболее высокие показатели обнаруживались при 30-минутном воздействии КФС «ЖИВАЯ ВОДА» (рис. 4в).
Также нами были проведены сравнительные исследования КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» и «ЖИВАЯ ВОДА» разных лет. Как показано на рис. 5, воздействие на ферментативную активность фагоцитов КФС, которые несли в себе информацию о воде 2012 года, достоверно было более выраженным, чем действие КФС с информацией 2016 года.
Наибольшее различие (p<0.09) индекса стимуляции отмечалось в отношении активности эктоферментов плазмалеммы при сравнении воздействия КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» на клетки. Эффект КФС «ЖИВАЯ ВОДА» на ферментативную активность фагоцитов в целом был не настолько выражен, по сравнению с воздействием КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК», о чем свидетельствовали низкие показатели внутриклеточного содержания изучаемых ферментов. На фоне такого невыраженного действия КФС «ЖИВАЯ ВОДА» на фагоциты различие между индексами стимуляции эффекта КФС в зависимости от года прописанной информации было не так значимо, как в случае контакта клеток с КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК».
Заключение
Организм человека – это энергетическая система. Долголетняя практика употребления «живой» воды, взятой из источников в период Крещения, подтвердила выводы ученых о поддержании энергетического баланса клеток с помощью воздействия положительно заряженной воды. Поскольку человек на 70% состоит из воды, то посредством воздействия КФС на структурное преобразование его жидких сред можно стабилизировать его гомеостаз. Сочетанное употребление структурированной на КФС воды в случае заболевания может положительно воздействовать на организм, уничтожая болезнетворные бактерии (КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК»), и усиливая противоинфекционный иммунитет (КФС «ЖИВАЯ ВОДА»). Так происходит коррекция защитной системы организма, а именно клеток врожденного иммунитета. Известно, что фагоциты, являясь звеном быстрого реагирования, играют важнейшую роль не только в антибактериальной, но и в противоопухолевой защите организма, а также в аллергических реакциях немедленной гиперчувствительности. В настоящее время данную систему рассматривают как совокупность иммунокомпетентных и иммунорегуляторных клеток, участвующих в межклеточных контактах и взаимодействиях, формирующих иммунный гомеостаз. От функциональной полноценности данных клеток во многом зависят генез, течение и исход многих патологических состояний.
Контроль – клетки без воздействия бактерий и КФС принят за 0%.
Клетки, зараженные S. еnteritidis, после воздействия КФС «ПРИРОДНЫЙ АНТИБИОТИК» в течение 30 мин (1) и 60 мин (2). Клетки, зараженные S. еnteritidis, после воздействия КФС «ЖИВАЯ ВОДА» в течение 30 мин (3) и 60 мин (4).
Контроль – клетки без воздействия бактерий и КФС принят за 0%.
1. Зараженные S. еnteritidis клетки без воздействия;
2. Клетки после воздействия КФС;
3. Зараженные S. еnteritidis клетки после 30 мин воздействия на них КФС;
4. Зараженные S. еnteritidis клетки после 60 мин воздействия на них КФС.
1. Зараженные S. еnteritidis клетки без воздействия;
2. Клетки после воздействия КФС;
3. Зараженные S. еnteritidis клетки после 30 мин воздействия на них КФС;
4. Зараженные S. еnteritidis клетки после 60 мин воздействия на них КФС.
